إجابة سؤال استخدم خريطة التقييد المقدمة للبلازميد pUC19 للإجابة على السؤال أدناه. لاحظ أن...:
يتضمن استنساخ الحمض النووي إدخال جين معين أو جزء من الحمض النووي من كروموسوم أكبر في جزيء صغير من الحمض النووي الناقل المتماثل، والذي يتم تضخيمه بعد ذلك، وبالتالي استنساخه. على وجه التحديد، تلعب إنزيمات القيد دورًا حيويًا في تقنية الحمض النووي المؤتلف من خلال تمكين التلاعب بالجينات وتعديلها. يمكن استنساخ شظايا الحمض النووي الناتجة عن الانقسام باستخدام إنزيمات القيد عن طريق ربطها بناقل استنساخ مناسب باستخدام رباطات الحمض النووي، لتشكيل الحمض النووي المؤتلف . ثم يتم تضخيم الشظية عن طريق إدخال الناقل المؤتلف في خلية مضيفة، والذي يكرر تسلسلات الحمض النووي على مدى عدة أجيال من انقسام الخلايا.
pUC19 هو ناقل استنساخ يستخدم بشكل شائع لإنشاء جزيئات الحمض النووي المعاد تركيبها. نظرًا لأنه يحتوي على مواقع تقييد متعددة، يمكن إدخال الجين المطلوب بسهولة في بلازميد pUC19 من خلال هضم إنزيم التقييد والربط. بعد ذلك، سيتم إدخال الحمض النووي المعاد تركيبه (أي بلازميد GOI + pUC19) إلى الخلية المضيفة في عملية تسمى التحول ، حيث يمكن للبلازميد أن يتضاعف ويعبر عنه. في هذه المرحلة، يمكن التمييز بين الخلايا التي تحتوي على البلازميد وتلك التي لا تحتوي عليه عن طريق زراعتها على وسائط زراعة مع أمبيسلين . نظرًا لأن pUC19 يحتوي على جين مقاومة الأمبيسلين (amp
), فقط الخلايا التي تم تحويلها بنجاح (أي أنها استوعبت البلازميد بالكامل) ستبقى على قيد الحياة في الوسائط .
ومن ثم، فإن الأمبير
في بلازميد pUC19 يكون مفيدًا في تحديد المستنسخات التي تم تحويلها بنجاح والتي تمتلك الحمض النووي المؤتلف.