إجابة سؤال اشرح النتائج بشكل مختصر واحسب حجم الإنترونات:
تفسيرات النتيجة:
يرجى ملاحظة أن S1 هو إنزيم ثنائي نوكلياز قاطع لسلسلة واحدة من الحمض النووي (إكسونوكلياز + إندونوكلياز) بينما ExoVII هو إكسونوكلياز قاطع لسلسلة واحدة. يحافظ الرحلان الكهربائي للحمض النووي المحايد على بنية الحمض النووي ذات السلسلتين بينما يحفز الرحلان الكهربائي القلوي فصل خيوط الحمض النووي. يحتوي الحمض النووي الجينومي أيضًا على إنترونات وإكسونات ومناطق غير مشفرة. يحتوي الحمض النووي التكميلي (cDNA) على إكسونات فقط. نظرًا لأننا نرى منتجين من منتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل B1 وB2 باستخدام cDNA كقالب على الرغم من أن البادئات تدعي أنها شديدة التحديد. قد يكون ذلك بسبب الوصل البديل للحمض النووي الريبي، وخاصة نوع الاحتفاظ بالإنترونات أو أي نوع آخر. نفترض أن أقصر منتج B2 هو منتج تفاعل البوليميراز المتسلسل الحقيقي أو المتوقع. من الممكن أيضًا أن يكون B2 منتج تفاعل البوليميراز المتسلسل غير المستهدف بينما يكون B1 صحيحًا. يمكننا القول أن كلًا من B1 وB2 يحتويان على تسلسل البداية والنهاية للإكسون A والإكسون C على التوالي. بالإضافة إلى ذلك، لاحظ أن الحمض النووي الجينومي أحادي السلسلة فقط هو الذي يتم تمييزه إشعاعيًا، وبالتالي لن نتمكن من رؤية أي نطاقات تتوافق مع منتج تفاعل البوليميراز المتسلسل B2 في الصورة الشعاعية على الرغم من وجود النطاقات في الهلام.
1. هضم S1: سيكون هناك ارتباطات مزدوجة السلسلة بين منتج تفاعل البوليميراز المتسلسل أحادي السلسلة B2 والحمض النووي الجينومي أحادي السلسلة في الإكسونات، ومن الواضح أن ذلك يشمل مناطق P1 وP2 كحدود. ومن ثم تنشأ انتفاخات في الإنترونات أحادية السلسلة في الحمض النووي الجينومي (انظر الشكل أدناه). وكما ذكرنا أعلاه، يمكن لثنائي نوكلياز S1 قطع الحمض النووي الجينومي أحادي السلسلة غير المهجن من النهايتين 5' و3' وكذلك من الداخل (الإنترونات غير المزدوجة) بحيث يتبقى فقط الحمض النووي المهجن أي ثنائي السلسلة. ومن ثم، نرى شريطًا واحدًا بطول 350 زوجًا قاعديًا في الرحلان الكهربائي المحايد. وفي الرحلان الكهربائي القلوي، من المتوقع وجود 3 أشرطة مهجنة أحادية السلسلة من الحمض النووي الجينومي المقابلة للإكسونات الثلاثة في منتج تفاعل البوليميراز المتسلسل B2، لكننا نرى فقط شرائط بطول 200 و150 زوجًا قاعديًا. وهذا ممكن فقط إذا افترضنا أن الإكسون B يتم تخطيه أثناء الربط.
2. هضم ExoVII: لا يزال علاج ExoVII (النوكلياز القاطع للسلسلة الأحادية) يحافظ على جميع الإكسونات والانتفاخات الداخلية لأنه لا يستطيع قطع الحمض النووي أحادي السلسلة داخل سلسلة الحمض النووي مثل ثنائي نوكلياز S1. وبالتالي فإن النطاق الذي يبلغ طوله 2000 زوج قاعدي في الرحلان الكهربائي القلوي يمثل الطول الإجمالي لجميع الإكسونات والإنترونات.
3. طول الإنترون 1 و2: يذكر السؤال أن طول الإنترونين متساويان (على سبيل المثال X bp لكل منهما). بافتراض أن B2 هو منتج تفاعل البوليميراز المتسلسل المستهدف،
ب2 + 2س= 2000
س= (2000-350)/2
X= 825 زوج أساسي.
يرجى ملاحظة أن الإجابة قد تكون مختلفة إذا افترضنا أن B1 هو منتج PCR المستهدف/الحقيقي.