يتكون الفورفورال في تجربة موليش عن طريق تفاعل حمض الكبريتيك المركز مع السكريات الأحادية. حيث يعمل الحمض كعامل مختزل، ويزيل جزيئات الماء من السكريات الأحادية، مما ينتج عن ذلك الفورفورال.
يمكن تمثيل تفاعل تكوين الفورفورال من السكر الخماسي (البنتوزة) كالتالي:
C6H12O6 + H2SO4 → C5H4O2 + 5H2O
ينتج عن هذا التفاعل الفورفورال (C5H4O2)، بالإضافة إلى خمسة جزيئات من الماء (H2O).
أما بالنسبة للسكر السداسي (الهكسوز)، فإن تفاعل تكوين الفورفورال كالتالي:
C6H12O6 + 2H2SO4 → C5H4O2 + 4H2O + CO2
ينتج عن هذا التفاعل الفورفورال (C5H4O2)، بالإضافة إلى أربعة جزيئات من الماء (H2O) وجزيء من ثاني أكسيد الكربون (CO2).
يتفاعل الفورفورال الناتج عن هذه التفاعلات مع محلول الفا نفثول (α-naphthol) في الكحول، مما ينتج عن ذلك مركب أحمر-بنفسجي يظهر كحلقة بين سطحي الانفصال. ويعد ظهور هذه الحلقة هو مؤشر إيجابي على وجود السكريات الأحادية في العينة المُختبرة.
وبشكل عام، يمكن تمثيل تفاعل تكوين المركب الأحمر-البنفسجي كالتالي:
C5H4O2 + α-naphthol → red-purple compound
يعتمد تكوين الفورفورال في تجربة موليش على عدة عوامل، أهمها:
- نوع السكريات الأحادية الموجودة في العينة المُختبرة.
- تركيز حمض الكبريتيك المستخدم.
- مدة تسخين العينة.
حيث أن السكريات الخماسية (البنتوزات) أكثر عرضة لتكوين الفورفورال من السكريات السداسية (الهكسوزات). كما أن زيادة تركيز حمض الكبريتيك تؤدي إلى زيادة كمية الفورفورال الناتج، مما يؤدي إلى ظهور حلقة أحمر-بنفسجية أكثر وضوحًا. أما زيادة مدة تسخين العينة، فإنها تؤدي إلى زيادة كمية الفورفورال الناتج، ولكنها قد تؤدي أيضًا إلى تكوين مركبات أخرى غير الفورفورال، مما قد يؤدي إلى ظهور لون غير أحمر-بنفسجي.