يتم إضافة الألفا-نفثول قبل حمض الكبريت في اختبار موليش للكشف عن الكربوهيدرات لأنه من الضروري أن يتم تحلل الكربوهيدرات إلى سكريات أحادية قبل أن تتفاعل مع الألفا-نفثول.
يعمل حمض الكبريت المركز على تكسير الروابط بين السكريات الأحادية، مما يؤدي إلى تكوين مركبات فيورفورال. هذه المركبات هي التي تتفاعل مع الألفا-نفثول لتكوين مركبات ذات لون بنفسجي داكن، مما يشير إلى وجود الكربوهيدرات.
إذا تم إضافة حمض الكبريت أولاً، فسوف يتفاعل مع الألفا-نفثول ويشكل مركبات غير قابلة للذوبان. لن تتمكن هذه المركبات من التفاعل مع السكريات الأحادية لتكوين مركبات ذات لون بنفسجي داكن، مما يجعل الاختبار غير حساس.
بشكل عام، يمكن تلخيص آلية اختبار موليش على النحو التالي:
- يتم إضافة الألفا-نفثول إلى العينة المحتوية على الكربوهيدرات.
- يتم تسخين الخليط إلى حوالي 100 درجة مئوية.
- يتم إضافة حمض الكبريت المركز إلى الخليط.
- يتم تسخين الخليط مرة أخرى إلى حوالي 100 درجة مئوية.
- إذا كانت العينة تحتوي على كربوهيدرات، فسوف يتكون مركب ذو لون بنفسجي داكن.
إذا لم تكن العينة تحتوي على كربوهيدرات، فسوف يظل الخليط عديم اللون.